由于高效液相色譜具有速度快、分離效果好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),因此應(yīng)用越來(lái)越廣泛。HPLC色譜柱是HPLC系統(tǒng)的重要組成部分。使用時(shí)需謹(jǐn)慎使用,使用后必須進(jìn)行保養(yǎng),以免下次使用出現(xiàn)問(wèn)題。色譜柱的頻繁更換是非常昂貴的,因此為了節(jié)約成本,需要更大程度的延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。同時(shí),必須小心維護(hù)色譜柱,以保持每次獲得結(jié)果時(shí)的準(zhǔn)確性和一致性。深圳恒譜生總結(jié)了7個(gè)關(guān)于色譜柱的誤區(qū),希望能延長(zhǎng)使用壽命。
誤區(qū)一:HPLC色譜柱不能反吹
一般情況下,液相色譜柱的設(shè)計(jì)耐壓值遠(yuǎn)高于ZUI大工作壓力。更換柱子時(shí),反吹可以清除柱頭一些吸附性強(qiáng)的物質(zhì),我們把這些殘留的物質(zhì)沖掉,防止壓力升高。但是如果你買(mǎi)的色譜柱在柱頭使用大粒徑填料,反吹時(shí)這部分填料會(huì)被沖掉。因此,在選擇是否反吹之前,您必須檢查您使用的液相色譜柱。
誤區(qū)二:所有C18列都一樣
在早期的HPLC系統(tǒng)中,C18是標(biāo)準(zhǔn)反相色譜的鍵合固定相,因此C18被用作反相色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。然而,時(shí)代不會(huì)停滯不前。人們對(duì)科學(xué)的追求和認(rèn)識(shí)越來(lái)越深刻,出現(xiàn)了更多的固定相,許多C18色譜柱也誕生了。雖然也使用硅膠作為基質(zhì),但各有其特定的填料鍵合合成工藝,因此色譜性能不同。所以僅僅因?yàn)槊Q都是C18列,認(rèn)為性能是一樣的是錯(cuò)誤的。
誤區(qū)三:空氣一旦進(jìn)入HPLC色譜柱就會(huì)損壞
我們都知道,當(dāng)色譜柱沒(méi)有連接到色譜儀時(shí),要保證色譜柱密封嚴(yán)密。但在實(shí)際應(yīng)用中,即使有少量空氣進(jìn)入色譜柱末端,也不是什么大問(wèn)題。色譜柱與色譜儀連接使用時(shí),在系統(tǒng)初始加壓過(guò)程中,空氣會(huì)在短時(shí)間內(nèi)被溶劑擠出。因此,不要僅僅因?yàn)樯倭靠諝膺M(jìn)入色譜柱就認(rèn)為色譜柱已損壞。
誤區(qū)四:不需要保護(hù)柱
事實(shí)上,使用保護(hù)柱有很多優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜的流動(dòng)相中常使用各種試劑,其中混有一些不溶或不純的物質(zhì)。大多數(shù)不溶物可以通過(guò)用篩子或膜過(guò)濾器過(guò)濾流動(dòng)相來(lái)去除,但不能*過(guò)濾非常細(xì)的顆粒。另外,流動(dòng)相調(diào)制后,不溶、不純的物質(zhì)有可能通過(guò)空氣、容器、人體等落下,這些不溶、不純的物質(zhì)會(huì)污染色譜柱、堵塞色譜柱,或?qū)ιV柱產(chǎn)生不佳影響。對(duì)分析的影響。
此時(shí),通過(guò)在色譜柱前安裝分析保護(hù)柱,可以防止其產(chǎn)生,保護(hù)色譜柱。與更換昂貴的分析柱相比,添加或更換保護(hù)柱只需很少的費(fèi)用。液相色譜保護(hù)柱幾乎沒(méi)有死體積,更換方便。適用于UHPLC系統(tǒng)的高壓,截留那些強(qiáng)保留且不可吸附的化合物。樣品和流動(dòng)相的過(guò)濾可以保持保護(hù)柱對(duì)化學(xué)污染物的吸附能力,更長(zhǎng)時(shí)間地保持柱效,延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
誤區(qū)五:反相色譜柱不能使用純水相
當(dāng)使用低有機(jī)溶劑含量或純水作為反相色譜柱的流動(dòng)相時(shí),一些色譜工作者會(huì)遇到相塌陷。因此,有人認(rèn)為反相色譜柱不能使用純水。但實(shí)際上,市面上銷售的反相色譜柱(如極性包埋柱和極性封蓋柱)都是親水性的,其表面特性允許使用純水,不會(huì)造成塌陷或保留時(shí)間偏移。
誤區(qū)六:粒徑越小,柱填料壓力越高,分離效果越好
色譜柱的性能不能僅僅通過(guò)填料是否超小粒徑和超高柱壓來(lái)評(píng)價(jià)?,F(xiàn)代對(duì)色譜柱柱特性的研究越來(lái)越深入,已經(jīng)開(kāi)發(fā)出一些提高色譜柱效率的方法。例如,新型表面多孔材料色譜柱的柱效與亞2?mUHPLC色譜柱一樣好。與傳統(tǒng)色譜柱相比,它的柱壓非常低。
誤區(qū)七:柱壓不會(huì)影響色譜分離效果
近年來(lái),HPLC色譜柱柱壓?jiǎn)栴}引起了眾多色譜工作者的關(guān)注。色譜圖的很多參數(shù)受柱壓影響,包括一些溶質(zhì)的摩爾體積、滯留體積、柱孔隙率、保留因子和流動(dòng)相等。如果在13.789MP的壓力下操作色譜柱,即使保留時(shí)間差異很小。但是,當(dāng)柱壓接近2000psi(13.789MPa)時(shí),柱壓的影響可能比較明顯。