c18色譜柱的柱效能是評價色譜性能的一項重要指標，混合物能否在色譜柱中得到分離，除取決于選擇合適的固定相外，還與色譜操作條件及色譜柱的裝填狀況等因素有關。

　　高效液相色譜柱的正確使用包含：加裝保護柱，過濾流動相和樣品，凈化樣品，避免過高的柱壓，注意溫度和酸堿度，正確及時的沖洗等。

　　1、加裝保護柱

　　保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學“拉圾”同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器，但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污然，因此，加裝保護柱是必要的，特別是在分析中藥、中成藥等復雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱不可少的措施。

　　保護柱填料應與分析柱一致，粒徑可較分析柱大。保護柱屬消耗品，經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(50～100次)后，出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時，應考慮更換保護柱。

　　2、過濾流動相和樣品

　　流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成，原則上，所有經(jīng)過色譜柱的流動相均應過濾，但在實際操作上應視具體情況而有所區(qū)別:當有機溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它超純水時，在能確保水和有機溶劑的質量且沒有受到污染時，過濾并無更多實際意義。

　　當流動相中含有緩沖鹽時，則過濾是必要的，如前所述，當緩沖溶液放置一段時間(視環(huán)境溫度不同而異，夏季一般不超過48 h，冬季一般不超過一周)后，在使用前還應重新過濾。

　　所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0. 45μm ( 0. 22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系，二者不可混用，以防止濾膜溶解而造成污染。

　　裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換，以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

　　3、凈化樣品

　　當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分，如產(chǎn)生吸附的蛋白質、糖等有機分子和強吸附性物質，以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質組分。

　　4、避免過高的柱壓

　　雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達6000 p si (磅/平方英寸) ，但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命，避免的方法是

　　(1)柱壓過高時，盡可能采用較小的流速，以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

　　(2)當流速較大時，應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

　　(3)使用手動進樣閥時，進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯(lián)用時，柱切換要避免在高壓下進行。

　　5、注意溫度和酸堿度

　　一般以硅膠為基質的c18色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應降低使用溫度。

　　溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而使填料性質改變，柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。

　　目前的鍵合硅膠色譜柱標示的pH適用范圍可達2～10，但在實際使用時應避免pH條件，特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用 ，如必須要在pH條件下使用時，可通過以下方法避免柱損害:

　　(1)在泵和進樣閥之間加裝預柱(飽和柱)來飽和流動相

　　(2)降低使用溫度

　　(3)檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗。

　　6、正確及時的沖洗

　　開始試驗前，應了解柱中當前是何種溶劑。對于新c18色譜柱，如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶，如不能混溶，要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。