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液相色譜柱科普知識大全,你真不一定都懂

更新時間:2020-12-08      點擊次數(shù):3226
   液相色譜柱科普知識大全,你真不一定都懂
  液相色譜柱的選擇應(yīng)根據(jù)目標(biāo)分析物的分子量大小、溶解性、Pka值,以及分離要求、儀器、成本等各方面來考慮,比如說可以根據(jù)分離目的選色譜柱,對映體分離常選擇手性柱,離子化色譜可選擇離子柱,蛋白多肽、DNA可選擇凝膠柱或離子交換柱,一般的小分子化合物可選擇普通反相柱,如C18、C8柱、苯基柱等等。
  根據(jù)實際需求和設(shè)備選擇填料粒徑,普通HPLC一般選擇5μm或3.5μm粒徑的色譜柱,而UPLC則常使用1.7μm——3.5μm的色譜柱。比表面積,高比表面積有助于分離,低比表面積更適合梯度洗脫程序。
  液相色譜柱的相關(guān)知識點擴展:
  1)平均顆粒度,顆粒度分布顆粒度(dp)越?。褐г礁?傳質(zhì)好,渦流擴散小)柱壓越高(滲透性差)顆粒分布
  顆粒分布越寬∶柱效低(滲透性差)
  顆粒形狀球型∶柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻
  無定型:柱床結(jié)構(gòu)不均勻流動相線性速度不均勻,譜帶擴展
  2)鍵合相化學(xué)
  1.影響化合物的分離度
  2.不同鍵合相對不同種類的化合物分離不同
  3.可能導(dǎo)致色譜的分離機理不同如:C18、C8、CN
  3)含碳量
  1.含碳量越高,k‘值越大(固定相傳質(zhì)效應(yīng)增加)
  2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分離、水解穩(wěn)定性好,重現(xiàn)性好、有利于極性化合物的拖尾改善
  3.低含碳量 有利于分析中性及堿性化合物、降低溶劑損耗、填料的端基封口、封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  4)填料的端基封口
  封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  5)硅膠的活性
  主要影響堿性化合物的保留行為:k',生產(chǎn)硅膠時處理溫度不同,硅膠活性也不同,是選擇性差異的主要來源,硅膠的雜質(zhì)含量,重金屬含量低,硅羥基活性小,拖尾減小,是色譜柱質(zhì)量好壞的重要標(biāo)志,填料的穩(wěn)定性,硅膠填料,pH:2-8,聚合物填料,pH:2-12,pH值小于2時,鍵合相水解,液相色譜法能否將某一樣品*分離,主要取決于液相色譜柱的選擇性和柱效,這在很大程度上取決于固定相的選擇是否適當(dāng)。
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